PCR法を超える新規DNA増幅法《クローニング・診断薬への活用》【提携セミナー】

　　セミナー　　バイオ/医薬/医療　　PCR法を超える新規DNA増幅法《クローニング・診断薬への活用》【提携セミナー】

開催日時	未定
担当講師	保川清氏末次正幸氏
開催場所	未定
定員	未定
受講費	未定

★ PCR法を超える核酸増幅法の紹介！！

PCR法を超える新規DNA増幅法
《クローニング・診断薬への活用》

【提携セミナー】

主催：株式会社技術情報協会

講座内容

・反応時間を大幅に減少したRPA法を用いたDNA増幅
・大腸菌を用いないRCR法を用いた長鎖DNA増幅法

習得できる知識

・PCR法を超える効率的な核酸増幅方法

担当講師

【第１部】京都大学大学院農学研究科　教授保川清氏
【第２部】立教大学理学部生命理学科教授末次正幸氏

セミナープログラム（予定）

(１０：３０～１2：3０)
「反応時間を大幅に減少したRPA法を用いたDNA増幅」
京都大学大学院農学研究科　教授保川清氏

【講座主旨】
核酸検査は核酸抽出、核酸増幅、検出の3工程から成ります。臨床診断では、検体は大病院や検査センターに移送され、この3工程が行われます。高価な装置が必要なため、先進国でも設備環境が整った大病院、検査センターでしか効率よく行えません。今後、核酸検査を現場や新興国で普及させるには、新たな技術が求められています。リコンビナーゼポリメラーゼ増幅（RPA）法は2006年に報告された40℃付近の一定温度でのDNA増幅法で、熱変性の代わりにリコンビナーゼと一本鎖DNA結合タンパク質を用います。本講演では、RPA法の概要と動向や、講演者が行った研究開発を中心として、核酸検査について話します。

【講座内容】
１.核酸検査全般
1.1 核酸抽出、核酸増幅および検出
1.2 DNA増幅法とRNA増幅法
1.3 一定温度増幅法
２. RPA法の概要と動向
2.1 原理
2.2 技術開発
2.3 特許
2.4 市場
３. RPA法の研究開発
3.1 酵素の生産
3.2 試薬組成の最適化
3.3 SARS-CoV-2の検出
3.4 核酸抽出
3.5 検出
【質疑応答】

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（13:30～16:00）
「大腸菌を用いないRCR法を用いた長鎖DNA増幅法」
立教大学理学部生命理学科教授末次正幸氏

【講座主旨】
PCR法を用いたDNA増幅におけるさまざまな課題を解決する全く新しいDNA増幅法を紹介する。
我々は大腸菌のゲノムを複製する酵素反応を26種の精製タンパク質を用いて再構成する中で、複製サイクル再構成系（RCR）を開発した。この系では環状DNAを30ºCで保温するだけで、
環状DNA分子の指数的な増幅が達成される。従来のPCRでは増幅困難なメガサイズレベルの長鎖DNAや、GC含有率の高いDNA、繰り返し配列などの増幅も可能である。本手法を利用した
セルフリークローニングや遺伝子診断用途などの展開が期待される。

【講座内容】
1.従来のDNA増幅法とその課題
1.1大腸菌を用いたDNAクローニングとその課題
1.2PCRを用いたDNA増幅とその課題
1.3ローリングサークル型DNA増幅（RCA）とその課題
2.大腸菌のゲノム複製を完全に再現した複製サイクル再構成系（RCR）
2.1大腸菌のゲノム複製機構
2.2複製サイクル再構成系の特性
2.2.1増幅能力（３時間で数十億倍）
2.2.2１分子DNAからの増幅
2.2.3最高性能の増幅正確性
2.2.4GC含有率、AT含有率の高いDNAの増幅
2.2.5繰り返し配列の増幅
2.2.6メガサイズレベルの長鎖DNAの増幅

3.複製サイクル再構成系(RCR)の利用
3.1リピート病の診断
3.2ヒトゲノムの長鎖DNA領域の選択的増幅
3.2.1環境中の環状DNAの調査・検出
3.2.2セルフリークローニング
・多断片DNA連結法と組み合わせた新しいプラスミド構築法
・大腸菌を使ったDNAクローニングの課題
カルタヘナ法
細胞毒性を持つDNA領域のクローニング
・セルフリーゲノム合成
ウイルスゲノムの人工合成
バクテリアゲノムの人工合成
ゲノム合成とELSI
【質疑応答】